|
|
Železo a regulace jeho metabolismu při zánětu a poruchách erytropoézy.
Gurieva, Iuliia ; Vokurka, Martin (vedoucí práce) ; Kaňková, Kateřina (oponent) ; Pláteník, Jan (oponent)
Železo je kovový prvek, který hraje v lidském organismu zásadní roli, ale jeho nedostatek i nadbytek jsou spojeny se závažnými chorobnými stavy. Hlavním regulátorem metabolismu železa je hepcidin, peptid tvořený v játrech. Nadbytek železa a zánět expresi hepcidinu zvyšují, nedostatek železa a aktivovaná erytropoéza ji snižují. Molekulární mechanismy regulace exprese hepcidinu a jejich hierarchie a propojení jsou poznány jen částečně. Hlavní regulační drahou je BMP/ SMAD, která reaguje na množství železa v organismu. Její součást tvoří řada molekul včetně hemojuvelinu a HFE a jejich mutace jsou spojeny s neadekvátně nízkou produkcí hepcidinu, nadbytkem železa a hereditární hemochromatózou. Erytroidní regulace, která musí mít na expresi hepcidinu negativní působení, je známa jen částečně, stejně jako její propojení s drahou BMP/ SMAD. V nedávné době byly popsány dva nové negativní regulátory exprese hepcidinu. Membránový enzym přítomný v hepatocytech - matriptáza-2 (MT-2, TMPRSS6) a solubilní faktor tvořený erytroblasty - erytroferron (ERFE). Cílem naší práce bylo zjistit, jak je MT-2 zapojena do erytroidní dráhy a zdali nemůže být místem, kde se protínají jednotlivé regulační dráhy. Stanovovali jsme expresi genů na úrovni mRNA pomocí real-time PCR a na úrovni proteinů pomocí imunoblotů. K pokusům...
|
|
|
Proteomická analýza v hematologickém výzkumu: identifikace alfa2-makroglobulinu jako specifického vazebného proteinu pro hormon hepcidin a změny proteomu leukemických buněk K562 v průběhu indukované diferenciace butyrátem sodným.
Pešlová, Gabriela ; Vyoral, Daniel (vedoucí práce) ; Krijt, Jan (oponent) ; Suttnar, Jiří (oponent)
Dizertační práce: "Proteomická analýza v hematologickém výzkumu: identifikace alfa2-makroglobulinu jako specifického vazebného proteinu pro hormon hepcidin a změn proteomu leukemických buněk K562 v průběhu indukované diferenciace butyrátem sodným" je postavena na proteomickém přístupu k identifikaci a funkční charakterizaci proteinů, které se účastní transportu hormonu metabolismu železa, hepcidinu v krevní plazmě a které se uplatňují při erytroidní diferenciaci modelových buněk linie K562. V první části se jedná o proteomické využití nedenaturujících, nativních separačních metod, zejména chromatografie a nativní elektroforézy, ve druhé části pak o porovnání proteomu kontrolních a butyrátem indukovaných buněk pomocí klasické techniky - dvojrozměrné SDS polyakrylamidové elektroforézy. Metody použité v dizertaci rozšiřují spektrum technik použitelných v experimentální hematologii. Dizertace spolu s publikovanými články pak přináší poznatky o nových proteinech důležitých pro metabolismus železa a diferenciaci červených krvinek. Klíčová slova: proteomická analýza, hepcidin, alfa2-makroglobulin, metabolismus železa, CML, K562, Na-butyrát
|
|
|
Železo a regulace jeho metabolismu při zánětu a poruchách erytropoézy.
Gurieva, Iuliia ; Vokurka, Martin (vedoucí práce) ; Kaňková, Kateřina (oponent) ; Pláteník, Jan (oponent)
Železo je kovový prvek, který hraje v lidském organismu zásadní roli, ale jeho nedostatek i nadbytek jsou spojeny se závažnými chorobnými stavy. Hlavním regulátorem metabolismu železa je hepcidin, peptid tvořený v játrech. Nadbytek železa a zánět expresi hepcidinu zvyšují, nedostatek železa a aktivovaná erytropoéza ji snižují. Molekulární mechanismy regulace exprese hepcidinu a jejich hierarchie a propojení jsou poznány jen částečně. Hlavní regulační drahou je BMP/ SMAD, která reaguje na množství železa v organismu. Její součást tvoří řada molekul včetně hemojuvelinu a HFE a jejich mutace jsou spojeny s neadekvátně nízkou produkcí hepcidinu, nadbytkem železa a hereditární hemochromatózou. Erytroidní regulace, která musí mít na expresi hepcidinu negativní působení, je známa jen částečně, stejně jako její propojení s drahou BMP/ SMAD. V nedávné době byly popsány dva nové negativní regulátory exprese hepcidinu. Membránový enzym přítomný v hepatocytech - matriptáza-2 (MT-2, TMPRSS6) a solubilní faktor tvořený erytroblasty - erytroferron (ERFE). Cílem naší práce bylo zjistit, jak je MT-2 zapojena do erytroidní dráhy a zdali nemůže být místem, kde se protínají jednotlivé regulační dráhy. Stanovovali jsme expresi genů na úrovni mRNA pomocí real-time PCR a na úrovni proteinů pomocí imunoblotů. K pokusům...
|
|
|
Proteomická analýza v hematologickém výzkumu: identifikace alfa2-makroglobulinu jako specifického vazebného proteinu pro hormon hepcidin a změny proteomu leukemických buněk K562 v průběhu indukované diferenciace butyrátem sodným.
Pešlová, Gabriela ; Vyoral, Daniel (vedoucí práce) ; Krijt, Jan (oponent) ; Suttnar, Jiří (oponent)
Dizertační práce: "Proteomická analýza v hematologickém výzkumu: identifikace alfa2-makroglobulinu jako specifického vazebného proteinu pro hormon hepcidin a změn proteomu leukemických buněk K562 v průběhu indukované diferenciace butyrátem sodným" je postavena na proteomickém přístupu k identifikaci a funkční charakterizaci proteinů, které se účastní transportu hormonu metabolismu železa, hepcidinu v krevní plazmě a které se uplatňují při erytroidní diferenciaci modelových buněk linie K562. V první části se jedná o proteomické využití nedenaturujících, nativních separačních metod, zejména chromatografie a nativní elektroforézy, ve druhé části pak o porovnání proteomu kontrolních a butyrátem indukovaných buněk pomocí klasické techniky - dvojrozměrné SDS polyakrylamidové elektroforézy. Metody použité v dizertaci rozšiřují spektrum technik použitelných v experimentální hematologii. Dizertace spolu s publikovanými články pak přináší poznatky o nových proteinech důležitých pro metabolismus železa a diferenciaci červených krvinek. Klíčová slova: proteomická analýza, hepcidin, alfa2-makroglobulin, metabolismus železa, CML, K562, Na-butyrát
|
|
|
Stanovení exprese molekul transportu a metabolismu železa u vybraných chronických onemocnění.
Chmelíková, Jitka ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Truksa, Jaroslav (oponent)
9 1 Abstrakt Železo je nezbytné pro lidský organismus vzhledem k jeho účasti jako kofaktoru enzymů v mnoha metabolických drahách. Je součástí hemoglobinu, čili je nepostradatelné pro přenos kyslíku do tkání. Má schopnost existovat ve dvojmocné i trojmocné formě. Dvojmocná forma se však účastní tvorby vysoce reaktivních hydroxylových aniontů, které organismus poškozují. Nehemové železo je přijímáno do cirkulace přes duodenální enterocyt. Vylučování železa se děje pouze deskvamací těchto buněk nebo krvácením. Proto musí být příjem železa přísně regulován. Nadměrný příjem železa je pozorován u některých chronických onemocnění (hereditární hemochromatóza, alkoholové onemocnění jater). Nedostatečný příjem železa může být naopak příčinou sideropenické anemie. Tato diplomová práce má za cíl stanovit expresi molekul transportu železa v duodenu u chronických onemocnění, která vznikají právě narušením regulace příjmu železa. Expresi molekul transportu železa (DMT1, Dcytb, ferroportin, hefestin) jsme stanovili na úrovni mRNA pomocí metody qPCR a na úrovni proteinu pomocí western blotu. Hladina sérového hepcidinu byla stanovena metodou ELISA. Naše výsledky ukazují zvýšení exprese mRNA transportérů DMT1 a ferroportinu, dále ferrireduktázy Dcytb a ferroxidázy hefestinu ve skupině anemiků. U exprese na úrovni proteinů...
|
|
|
Separace hepcidinu na magnetických sorbentech s následnou analýzou pomocí MALDI-TOF-MSí
Vávrová, Jana ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Tichá, Marie (oponent)
Hepcidin je peptid, který se tvoří v hepatocytech a který je sekretován do krevní plazmy a vylučován močí. Předpokládá se, že tento peptid hraje důležitou regulační úlohu v metabolismu železa a určení změn jeho hladiny v moči a krevním séru má význam pro diagnózu závažných onemocnění. Dosud popsané metody pro stanovení hepcidinu v moči a séru mají omezení a nelze je obecně používat. V současné době se pro konečnou analýzu hepcidinu používá MALDI-TOF MS. Před tímto závěrečným krokem je však nutná separace peptidu ze vzorků moči nebo séra. Předmětem diplomové práce bylo studium separačních metod, které by následně umožnily MALDI-TOF MS analýzu hepcidinu. V naší práci jsme použili magnetické sorbenty lišící se gelovou matricí a funkčními skupinami. Byly použity jednak komerční magnetické sorbenty obsahující -COOH skupiny a jednak hydrofilní polymetakrylátové mikročástice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými kovovými ionty (připravené na Ústavu makromolekulární chemie AV ČR). Naše výsledky prokázaly, že pro adsorpci hepcidinu při pH 6,8 je možné použít komerční magnetické částice fluidMAG-CMX, SiMAG-Carboxyl a SiMAG-Silanol. Magnetické částice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými měďnatými ionty jsou pro adsorpci standardu hepcidinu použitelné v širokém rozmezí pH, zatímco v případě imobilizovaných...
|
host ::
RSS.